革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

[目的]构建革胡子鲶生长激素基因原核表达体系。[方法]采用PCR方法,扩增得到了革胡子鲶生长激素基因成熟肽的cDNA序列,将该序列克隆至原核表达载体pRSET-A,构建重组质粒pRSET-mGH,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。[结果]革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA序列全长534 bp,编码1个由178个氨基酸残基组成的生长激素成熟肽,分子量为20.28 kDa,等电点为5.93。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的目的融合蛋白分子量为27.41 kDa,主要以非可溶性的包涵体形式存在于菌体沉淀中。目的融合蛋白的表达量高达细菌沉淀蛋白总量的36.8%。[结论]该研究为革胡子鲶生长激素的产业化开发和应用奠定了基础。     

不同水解程度丝素肽对黑色素生成抑制能力的研究

探讨了脱胶丝素经盐溶解后进行碱水解时 ,不同条件对丝素水解程度及不同水解程度丝素肽对蚕血黑色素生成的抑制能力的影响 .结果发现 ,温度对丝素的水解程度影响最大 ,时间其次 ,浓度的影响最小 ;丝素蛋白液未水解时 ,其对黑色素抑制率很低 ,只有 2 8.34% ,而丝素水解后 ,抑制率迅速提高到 4 8.95 % ,并且随着水解程度的加深不断提高 ,当氨基氮浓度达 0 .4 76 5g·L-1时 ,其对黑色素生成抑制率达最高值 6 7.14 % ;之后 ,随着水解程度的增加 ,其黑色素生成抑制率反而下降 .     

培养液中不同来源肽摄取规律的研究

利用体外批次培养研究了大豆肽、玉米肽和瘤胃肽的摄取规律.结果表明,随着培养时间的延长,3种肽的摄取量与摄取率均显著增加(P＜0.01或P＜0.05),而摄取速率却显著降低(P＜0.01);当培养液中肽含量增加时,3种来源肽的摄取量显著增加(P＜0.01或P＜0.05),摄取速率显著提高(P＜0.01或P＜0.05),而摄取率却显著下降(P＜0.05).对于3种不同肽源来说,培养初期3种肽的摄取量和摄取率没有明显差异(P＞0.05),而摄取速率却存在差异,其中瘤液肽的摄取速率显著高于大豆肽和玉米肽.培养中后期肽含量较高时,瘤胃液肽的摄取量和摄取率显著高于大豆肽(P＜0.05)和玉米肽(P＜0.01);肽含量较低时,瘤胃液肽的摄取量和摄取率显著高于玉米肽(P＜0.05),但与大豆肽差异不显著(P＞0.05).结果表明,肽的来源和结构不同,其摄取规律也有异.     

重叠区扩增法合成抗菌肽B基因

人工设计并合成了抗菌肽 B基因的 4个寡聚核苷酸片段 ,通过重叠区扩增法 ,扩增出了相当于抗菌肽基因全长的寡聚核苷酸片段。经克隆测序 ,证明成功地实现了抗菌肽基因的人工合成、拼接和克隆。     

活性氧物质在植物抗病中的作用

简述了活性氧的产生及清除。综述了活性氧在植物抗病中的作用,主要包括:直接杀死入侵病原菌,增强细胞壁的强度和氧化交联,诱导植保素合成、系统获得抗性、过敏性反应、细胞程序性死亡和防卫基因的表达,激活或与其他信号分子协同作用。总结了活性氧在植物体中的负作用。     

酶法制备活性肽的讨论

酶解蛋白质产生的短肽混合物中,一些肽段不仅提供营养,而且具有特殊生理功 能,称为活性肽。目前,由于蛋白酶解制备法可实现规模化大生产,活性肽的主要生产方法是酶 法制备活性肽。本文讨论了酶法制备活性肽工艺流程的主要步骤,判定酶解效果的指标,酶的 选用,酶解各种影响因素如温度、酸度、加酶量、底物浓度、水解时间等对应参数的确定。对当前 存在的问题提出了理论上的的解决方法,并对在新的技术背景下,如何更高效率地生产活性肽 进行了展望。     

中链脂肪酸抗菌和诱导防御肽表达的功能及其在仔猪饲料中的应用

近年,越来越多的研究表明,中链脂肪酸（MCFAs）抵抗病原菌是哺乳动物先天防御系统的重要组成部分,而且MCFAs也能够诱导人、猪和鸡内源性防御肽的表达,MCFAs的这些新功能尚未引起重视。MCFAs还和饲用有机酸或饲用植物精油具有协同抗菌增效作用,可以减少这些活性物质的使用量。相比于长链脂肪酸,日粮中添加MCFAs能显著地提高动物机体内氧气消耗量和线粒体呼吸速率,但产生活性氧自由基少,特别适合幼龄动物肠代谢和肝代谢所需的快速能量供应特点。日粮添加低浓度MCFAs（0.1%—0.5%,质量比）能显著提高新生或断奶仔猪存活率、粗蛋白粗脂肪消化率、饲料转化率,调节肠道菌群和改善肠上皮结构,进而促进生长。基于MCFAs的上述功能,将MCFAs与饲用有机酸或植物精油复配制备成微囊颗粒,可能是其用于仔猪抗生素替代品的尚佳方式。     

蜡样芽孢杆菌致吐毒素的毒性作用与生物合成研究进展

蜡样芽孢杆菌是一类兼性厌氧的革兰氏阳性杆菌,可以产生芽孢抵抗不良环境,并广泛存在于土壤、水、空气和多种食物中。致病性蜡样芽孢杆菌是常见的食源性条件致病菌之一,其引发的食物中毒主要是由其产生的毒素导致的。致吐毒素cereulide是致病性蜡样芽孢杆菌产生的重要毒素之一,是一种小分子亲脂性十二环肽,结构性质十分稳定。Cereulide能够引起恶心、呕吐等轻微的食物中毒症状,也可导致如肝性脑病、急性肝脏衰竭等严重致死的疾病。当前对于cereulide的毒性作用机制研究局限于其刺激传入迷走神经引起呕吐症状,以及作为钾离子载体,诱导线粒体膜电位丧失,并最终导致细胞死亡,而对于其导致的严重肝脏和脑部病变的毒性作用机制研究仍十分不足。Cereulide是由cereulide合成酶基因簇(ces)编码,非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide-synthetase, NRPS)系统控制合成的。Cereulide由两个羟基酸和两个氨基酸残基[-D-HIC-D-Ala-L-HIV-L-Val-]经3次迭代组成三聚体缩酚酞,其结构特殊并有很强的代表性,但因NRPS合成系统的灵活性会产生许多变体,因此cereulide的毒性与其生物合成过程息息相关。文章在现有文献报道和研究数据的基础上,总结并提出了cereulide的生物合成机理：首先,cereulide合成基因簇的CesA和CesB结构域分别识别D-α-酮羧酸、L-丙氨酸、L-α-酮异戊酸和L-缬氨酸,通过共价结合形成cereulide的主要合成单元二肽;其次,依照上述过程重复合成四肽;再通过重复反应合成第二个四肽,两个四肽通过酯化形成八肽;再次重复上述反应,形成三元络合的产物肽;最后,由于ces-NRPS的硫酯酶结构域活性中心表面结构阻止外部水分子进入,并诱导内部亲核攻击反应,最终释放出环状cereulide。目前,由产cereulide的蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒风险被低估。并且,本团队前期研究发现部分芽孢杆菌微生态制剂中混有产cereulide的蜡样芽孢杆菌菌株。因此,产cereulide蜡样芽孢杆菌的存在对食品安全和公共健康均构成了潜在风险。文章综述了cereulide的毒性作用及机制,为进一步研发cereulide防控措施提供科学依据;总结并提出了cereulide的生物合成机理,强调了催化酮酸形成酯的酮还原酶域(KR),及形成重复单元和环肽的硫酯酶域(TE)在其合成中的重要作用,为阐明类似结构的非核糖体肽合成提供新的思路。     

大豆蛋白肽-玉米淀粉复合物的制备及其性质研究

以玉米淀粉为原料,采用了压热-酶法并加入一定量的大豆蛋白肽（5%、10%、15%和20%, W/W）制备了大豆蛋白肽-玉米淀粉复合物,研究了复合物的理化性质和体外消化性。结果表明,玉米淀粉颗粒为椭球形或多棱角形,而复合物形貌受到了严重的破坏,为大小不一的片状结构。复合物红外光谱的-OH向低波数处移动,说明和玉米淀粉相比,复合物分子的有序性升高。玉米淀粉的结晶结构为A型,经过压热-酶处理后的复合物结晶结构发生了明显改变,变为B+V型结构。复合物的熔融温度最高为126.81 ℃,说明复合物的崩解温度很高,结晶结构紧密并且热稳定性更高。复合物的体外消化性显著降低,抗性淀粉含量大幅提高,并且随着大豆肽添加量的增加抗酶解性逐渐升高。大豆蛋白肽与淀粉之间主要的相互作用力为氢键,相互作用产生的复合物性质发生了很大的改变,对其特性进行研究可以为在食品领域的应用提供理论依据。     

大豆肽的生理功能和制备工艺

大豆肽是大豆蛋白质的水解产物,主要功能性营养物质包括多肽、寡肽、游离氨基酸和糖类,其相对分子质量低,易于消化吸收。丰富的小肽能调节矿物质、脂类代谢,降低胆固醇,提高免疫力。文章综述了大豆肽的生理功能和制备工艺。